Qiagen质粒提取试剂盒RNA纯化方案的优化

背景

随着研究的深入，越来越多的实验需要提取RNA。然而在DNA和RNA共存的混合物中，如何纯化RNA却不失去完整性和活性，一直是困扰着很多科研人员的难题。Qiagen质粒提取试剂盒是一种常见的RNA提取试剂盒，其原理是基于硅胶膜诱导结晶（silica-based binding and elution）的方法。该试剂盒的流程简便，时间短，且可同时纯化DNA。但是，对于高脂质样品（如脂肪组织等）的RNA提取来说，必须对该方案进行优化，以获得更高质量和浓度的RNA。

优化

为了优化Qiagen质粒提取试剂盒的RNA提取方案，我们采用了以下的操作步骤：

1. 前处理RNA以减少脂质的干扰

脂质在硅胶膜上的吸附能力比RNA强，会影响RNA结合硅胶膜的效果，从而影响RNA的浓度和质量。因此，在使用Qiagen试剂盒之前，需要通过改变标准的组织破碎方法来降低脂肪杂质的干扰。一种可行的方法是使用Trizol试剂分离土地脂质和RNA，并在最后的硅胶膜步骤中只加入RNA的上清液。在这个步骤中，我们还通过超声波处理和冻融-解冻来获得更好的细胞破碎。

2. 使用硅胶膜的前处理步骤进行纯化RNA

为了获取更高质量的RNA，在硅胶膜处理之前，需要进行前处理操作。 Qiagen质粒提取试剂盒提供一种将抗氧化剂和下游的RNase解体剂加入样品中的前处理步骤，以保持RNA的完整性。在添加前处理试剂后，样品完全在硅胶膜上结晶。此外，我们还将样品在高速离心下行洗涤，可大大减少脂肪和其他杂质的残留。

3. 利用试剂盒的后处理步骤来提高RNA的浓度

加入RNase-free水进行RNA的洗脱是一种常见的方法，在水的流动和时间充分时，比较适用于不同细胞和组织类型的RNA纯化。然而，在脂肪高含量的样品中，RNA的效益可能很低，从而限制了北方杂交和定量PCR反应的使用。我们试验了直接用Tris-EDTA或RNase-free water等缓冲液进行RNA的洗脱，发现RNA的纯度和浓度的两者均高于前一方法。其中使用Tris-EDTA缓冲液洗脱RNA（pH8）可以更好地保护RNA骨架，同时RIN值可提高。

在脂肪组织等高脂肪含量的样品中，Qiagen质粒提取试剂盒RNA的优化方案可以获得更高质量和更高浓度的RNA。这个优化方案可以用于准确定量不同种类的RNA。是关于Qiagen质粒提取试剂盒RNA纯化方案的优化的详细介绍，希望能对你们的实验工作有所帮助。